ⅠNयूक्लिक एसिडiपरिचय
न्यूक्लिक एसिडलाई डिओक्साइरिबोन्यूक्लिक एसिड (डीएनए) र रिबोन्यूक्लिक एसिड (आरएनए) मा विभाजन गरिएको छ, जसमध्ये आरएनएलाई राइबोसोमल आरएनए (आरआरएनए), मेसेन्जर आरएनए (एमआरएनए) र ट्रान्सफर आरएनए (टीआरएनए) मा विभाजन गरिएको छ।डीएनए मुख्यतया न्यूक्लियस, माइटोकोन्ड्रिया र क्लोरोफर्ममा केन्द्रित हुन्छ, जबकि आरएनए मुख्यतया साइटोप्लाज्ममा वितरित हुन्छ।जीन अभिव्यक्तिको भौतिक आधारको रूपमा, न्यूक्लिक एसिड निकासीले आणविक जीवविज्ञान अनुसन्धान र क्लिनिकल आणविक निदानमा अत्यन्त महत्त्वपूर्ण भूमिका खेल्छ।न्यूक्लिक एसिड निकासीको एकाग्रता र शुद्धताले त्यसपछिको PCR, अनुक्रमण, भेक्टर निर्माण, इन्जाइम पाचन र अन्य प्रयोगहरूलाई प्रत्यक्ष असर गर्नेछ।
Ⅱ न्यूक्लिक एसिड निकासी र शुद्धीकरण विधि
① फिनोल/क्लोरोफर्म निकासी विधि
फेनोल/क्लोरोफर्म निकासी DNA निकासीको लागि एक शास्त्रीय विधि हो, जसले मुख्यतया नमूनाहरूको उपचार गर्न दुई फरक जैविक विलायकहरू प्रयोग गर्दछ, पानीको चरणमा DNA आधारित न्यूक्लिक एसिड, जैविक चरणमा लिपिडहरू, र दुई चरणहरू बीचको प्रोटिनहरू।यो विधि कम लागत, उच्च शुद्धता र राम्रो प्रभाव को फाइदा छ।बेफाइदाहरू जटिल सञ्चालन र लामो समय हो।
② Trizol विधि
Trizol विधि आरएनए निकासी को लागी एक शास्त्रीय विधि हो।Trizol विधि क्लोरोफर्म संग सेन्ट्रीफ्यूगेशन पछि जलीय चरण र जैविक चरण मा विभाजित छ, जसमा RNA जलीय चरण मा भंग हुन्छ, जलीय चरण एक नयाँ EP ट्यूब मा स्थानान्तरण गरिन्छ, isopropanol थपे पछि वर्षा प्राप्त गरिन्छ, र त्यसपछि इथेनॉल शुद्धीकरण।यो विधि जनावरको तन्तु, कोशिका र ब्याक्टेरियाबाट आरएनए निकासीका लागि उपयुक्त छ।
③ केन्द्रापसारक स्तम्भ शुद्धीकरण विधि
सेन्ट्रीफ्यूज स्तम्भ शुद्धिकरण विधिले विशेष सिलिकन म्याट्रिक्स शोषण सामग्रीहरू मार्फत विशेष रूपमा DNA सोस्न सक्छ, जबकि RNA र प्रोटीन सजिलैसँग पास गर्न सक्छ, र त्यसपछि न्यूक्लिक एसिड संयोजन गर्न उच्च नुन कम PH प्रयोग गर्दछ, न्यूक्लिक एसिडलाई छुट्याउन र शुद्ध गर्न कम नुन उच्च PH मान इल्युसन।फाइदाहरू उच्च शुद्धीकरण एकाग्रता, उच्च स्थिरता, जैविक विलायकको आवश्यकता छैन, र कम लागत हो।बेफाइदा यो छ कि यसलाई चरण-दर-चरण सेन्ट्रीफ्यूज गर्न आवश्यक छ, थप सञ्चालन चरणहरू।
④ चुम्बकीय मोती विधि
चुम्बकीय मोती विधि भनेको लाइसेट मार्फत सेल टिश्यू नमूना विभाजित गर्नु हो, नमूनामा न्यूक्लिक एसिड छोड्नुहोस्, र त्यसपछि न्यूक्लिक एसिड अणुहरू चुम्बकीय मोतीको सतहमा विशेष रूपमा सोखिन्छन्, जबकि प्रोटीन र चिनी जस्ता अशुद्धताहरू छोडिन्छन्। तरल पदार्थ।सेल टिस्यु स्प्लिटिङ्, न्यूक्लिक एसिडसँग चुम्बकीय मोती बाइन्डिङ, न्यूक्लिक एसिड धुने, न्यूक्लिक एसिड उत्सर्जन, आदिका चरणहरू मार्फत, शुद्ध न्यूक्लिक एसिड प्राप्त हुन्छ।फाइदाहरू सरल सञ्चालन र छोटो समयको प्रयोग हो, चरण सेन्ट्रीफ्युगेशनको आवश्यकता बिना।योसँग कम प्राविधिक आवश्यकताहरू छन् र स्वचालित र ठूलो सञ्चालन महसुस गर्न सक्नुहुन्छ।चुम्बकीय मनका र न्यूक्लिक एसिडको विशिष्ट संयोजनले निकालिएको न्यूक्लिक एसिडलाई उच्च एकाग्रता र शुद्धताको साथ बनाउँछ।हालको बजार मूल्य तुलनात्मक रूपमा महँगो हुनु बेफाइदा हो।
⑤ अन्य विधिहरू
माथिका चारवटा विधिहरू बाहेक, त्यहाँ उमालेको क्र्याकिंग, केन्द्रित नुन विधि, एनियोनिक डिटर्जेंट विधि, अल्ट्रासोनिक विधि र इन्जाइम्याटिक विधि आदि छन्।
Ⅲ न्यूक्लिक एसिड निकासी को प्रकार
Foregene सँग विश्वको अग्रणी प्रत्यक्ष PCR प्लेटफर्म, डबल-स्तम्भ आरएनए आइसोलेशन प्लेटफर्म (DNA-मात्र + RNA मात्र) छ।मुख्य उत्पादनहरूमा DNA/RNA आइसोलेशन किटहरू, PCR र प्रत्यक्ष PCR अभिकर्मकहरू आणविक प्रयोगशाला अभिकर्मक श्रृंखलाहरू समावेश छन्।
① कुल आरएनए निकासी
कुल आरएनए निकासी नमूनाहरूमा रगत, कोशिकाहरू, जनावरहरूको तन्तु, बोटबिरुवा, भाइरसहरू, आदि समावेश छन्। कुल आरएनए निकासी मार्फत उच्च शुद्धता र उच्च एकाग्रता कुल आरएनए प्राप्त गर्न सकिन्छ, जुन RT-PCR, चिप विश्लेषण, इन भिट्रो अनुवादमा प्रयोग गर्न सकिन्छ। आणविक क्लोनिङ, डट ब्लट र अन्य प्रयोगहरू।
फोरजीन सम्बन्धितआरएनए अलगाव किट
पशु कुल आरएनए अलगाव किट--छिटो र कुशलतापूर्वक विभिन्न जनावरको तन्तुबाट उच्च शुद्धता र उच्च गुणस्तरको कुल आरएनए निकाल्नुहोस्।
सेल कुल आरएनए अलगाव किट--उच्च शुद्ध र उच्च गुणस्तरको कुल आरएनए विभिन्न कल्चर गरिएको सेलहरूबाट ११ मिनेटमा प्राप्त गर्न सकिन्छ।
प्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट--कम पोलिसेकराइड र पोलिफेनोल सामग्रीको साथ बिरुवाको नमूनाहरूबाट द्रुत रूपमा उच्च गुणस्तरको कुल आरएनए निकाल्नुहोस्।
भाइरल आरएनए आइसोलेशन किट- प्लाज्मा, सीरम, सेल-फ्री बडी फ्लुइड्स र सेल कल्चर सुपरनेटेन्टहरू जस्ता नमूनाहरूबाट भाइरल आरएनएलाई द्रुत रूपमा अलग गर्नुहोस् र शुद्ध गर्नुहोस्।
② जीनोमिक डीएनए निकासी
जीनोमिक डीएनए निकासी नमूनाहरूमा माटो, मल, रगत, कोशिका, जनावरको तन्तु, बोटबिरुवा, भाइरस, इत्यादि पर्दछन्। जीनोमिक डीएनए निकासीलाई इन्जाइम पाचन, डीएनए पुस्तकालय निर्माण, पीसीआर, एन्टिबडी तयारी, पश्चिमी ब्लट हाइब्रिडाइजेशन विश्लेषण, जीन चिप, उच्च प्रयोग गर्न सकिन्छ। -थ्रुपुट अनुक्रम र अन्य प्रयोगहरू।
फोरजीन सम्बन्धितडीएनए अलगाव किट
पशु टिस्यू डीएनए अलगाव किट- धेरै स्रोतहरूबाट जीनोमिक डीएनएको द्रुत निकासी र शुद्धीकरण, जस्तै जनावरको तन्तु, कोशिकाहरू, आदि।
रक्त DNA मिडी किट (1-5ml)--छिटो उच्च गुणस्तरको जीनोमिक डीएनए एन्टीकोगुलेट रगत (१-५ एमएल)बाट शुद्ध गर्नुहोस्।
Buccal Swab/FTA कार्ड DNA Isolation Kit- बकल स्वाब/एफटीए कार्ड नमूनाहरूबाट उच्च गुणस्तरको जीनोमिक डीएनए द्रुत रूपमा शुद्ध गर्नुहोस्।
प्लान्ट डीएनए आइसोलेशन किट- बिरुवाका नमूनाहरूबाट (पोलिसेकराइड र पोलिफेनोल बिरुवाका नमूनाहरू सहित) द्रुत रूपमा शुद्ध गर्नुहोस् र उच्च गुणस्तरको जीनोमिक डीएनए प्राप्त गर्नुहोस्।
③ प्लाज्मिड निकासी
प्लाज्मिड कोशिकाहरूमा एक प्रकारको गोलाकार सानो अणु डीएनए हो, जुन डीएनए पुन: संयोजनको लागि एक सामान्य वाहक हो।प्लाज्मिड निकासीको विधि भनेको आरएनए हटाउने, ब्याक्टेरियाको जीनोमिक डीएनएबाट प्लाज्मिड अलग गर्ने र तुलनात्मक रूपमा शुद्ध प्लाज्मिड प्राप्त गर्न प्रोटीन र अन्य अशुद्धताहरू हटाउने हो।
सामान्य प्लाज्मिड मिनी किट- नियमित आणविक जीवविज्ञान प्रयोगहरू जस्तै रूपान्तरण र इन्जाइम पाचनका लागि रूपान्तरित ब्याक्टेरियाबाट उच्च-गुणस्तरको प्लाज्मिड डीएनए द्रुत रूपमा शुद्ध गर्नुहोस्।
④ अन्य निकासी प्रकार, miRNA निकासी, आदि।
पशु miRNA अलगाव किट- छिटो र प्रभावकारी रूपमा विभिन्न जनावरको तन्तु र कोशिकाहरूबाट २०-२००न्ट miRNA, siRNA, snRNA को साना RNA टुक्राहरू निकाल्नुहोस्।
Ⅳ न्यूक्लिक एसिड निकासी र शुद्धिकरण परिणामका लागि आवश्यकताहरूs
① न्यूक्लिक एसिडको प्राथमिक संरचनाको अखण्डता सुनिश्चित गर्न।
② प्रोटीन, चिनी, लिपिड र अन्य macromolecules को हस्तक्षेप कम गर्नुहोस्
③ त्यहाँ कुनै कार्बनिक विलायक वा धातु आयनहरूको उच्च एकाग्रता हुनु हुँदैन जसले न्यूक्लिक एसिड नमूनाहरूमा इन्जाइमलाई रोक्न सक्छ।
④ RNA र अन्य न्यूक्लिक एसिड प्रदुषण DNA निकाल्दा हटाउनु पर्छ, र यसको विपरित।
पोस्ट समय: नोभेम्बर-24-2022
